Die Hauptunterschied zwischen Gelelektrophorese und SDS PAGE ist das Gelelektrophorese ist eine Technik, die verwendet wird, um DNA, RNA und Proteine ​​zu trennen, während SDS-PAGE eine Art von Gelelektrophorese ist, die hauptsächlich zur Trennung von Proteinen verwendet wird. Im Allgemeinen liefert SDS PAGE eine bessere Auflösung als die reguläre Gelelektrophorese.

Gelelektrophorese und SDS PAGE sind Techniken in der Biotechnologie, die bei der Trennung von Makromolekülen basierend auf Ladung und Größe helfen. Typischerweise verwendet Gelelektrophorese Agarosegel-Stabs für die Trennung, während SDS PAGE Polyacrylamid-Gel-Stabs verwendet.

Abgedeckte Schlüsselbereiche

1. Was ist Gelelektrophorese? – Definition, Vorgehensweise, Bedeutung 2. Was ist eine SDB-SEITE? – Definition, Vorgehensweise, Bedeutung 3. Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Gelelektrophorese und SDS PAGE? – Überblick über die gemeinsamen Funktionen 4. Was ist der Unterschied zwischen Gelelektrophorese und SDS PAGE – Vergleich der wichtigsten Unterschiede

Schlüsselbegriffe: Agarose, DNA, Gelelektrophorese, Polyacrylamid, Proteine, SDB-SEITE

Was ist Gelelektrophorese?

Gelelektrophorese ist eine Technik, die Fragmente von Makromolekülen wie DNA, RNA und Proteinen basierend auf ihrer Größe und Ladung trennt. Bei der Gelelektrophorese bewegen sich Makromoleküle unter dem Einfluss eines elektrischen Feldes auf einer Gelmatrix, die Poren enthält, durch die sich die Makromoleküle bewegen. Gelelektrophorese ist die allgemeine Technik, die DNA aus PCR-, RFLP-, Klonierungs-, DNA-Sequenzierungs- oder Blotting-Techniken analysiert. Nanopartikel können auch durch Gelelektrophorese getrennt werden. Der Gelstab wird aus einem Polysaccharid namens Agarose hergestellt, das aus Algen gewonnen wird. Agarosegele bestehen aus langkettigen Agarosemolekülen, die wie ein Spinnennetz miteinander verbunden sind. Das Video 1 beschreibt die Herstellung eines Agarosegels.

Sowohl DNA als auch RNA enthalten Phosphatgruppen an jedem ihrer Monomernukleotide. Daher besitzen sie im gesamten Molekül die gleiche negative Ladung. Außerdem wandern sie unter dem elektrischen Feld in Richtung der positiven Elektrode. Die Migrationsgeschwindigkeit hängt von der Größe der Nukleinsäure ab. Kürzere Moleküle wandern schneller durch die Poren, während die größeren etwas Zeit brauchen.

Abbildung 1: DNA-Banden auf einem Agarose-Gel

Was ist SDB-SEITE

SDS PAGE (Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese) ist eine analytische Technik, die verwendet wird, um geladene Moleküle basierend auf der Größe zu trennen. Bei diesem Verfahren wird SDS verwendet, um Proteine ​​durch Denaturierung zu isolieren. Da SDS ein Detergens ist; die Tertiärstruktur von Proteinen wird dadurch zerstört und das gefaltete Protein in ein lineares Molekül gebracht. Außerdem umhüllt es dieses lineare Proteinmolekül mit einer einheitlichen negativen Ladung. SDS PAGE besteht aus zwei Gelen mit unterschiedlichen Konzentrationen. Die obere Schicht wird als Sammelgel bezeichnet, auf das die Proben geladen werden, während die untere Schicht als auflösendes Gel bezeichnet wird. Die Polyacrylamidkonzentration des Stapelgels beträgt 3,5-4% (große Poren) und konzentriert Proteine ​​in einer Bande. Die Polyacrylamidkonzentration im Trenngel beträgt 4-20% (kleine Porengröße) und trennt Proteine ​​anhand ihrer Größe. Das Video 2 zeigt die Erstellung einer SDB-SEITE.

SDS PAGE bietet eine schnelle Trennung von Proteinen und unterstützt die anschließende Analyse wie Western Blotting.

Abbildung 2: Proteinbanden auf der SDS PAGE

Da das Auflösungsvermögen von SDS PAGE höher ist als bei einem normalen Agarosegel, hilft SDS PAGE dabei, kleine DNA-Fragmente mit einer Größe von 5-500 bp zu trennen.

Ähnlichkeiten zwischen Gelelektrophorese und SDS PAGE

Unterschied zwischen Gelelektrophorese und SDS PAGE

Definition

Gelelektrophorese: Verfahren zum Trennen von Fragmenten von Makromolekülen wie DNA, RNA und Proteinen basierend auf ihrer Größe und Ladung

SDB-SEITE: Eine analytische Technik, die verwendet wird, um geladene Moleküle basierend auf der Größe zu trennen

Komposition

Gelelektrophorese: Im gesamten Gel gleich; bestehend aus Agarose

SDB-SEITE: Zwei Gele mit unterschiedlichen Konzentrationen; aus Polyacrylamid

Konfiguration ausführen

Gelelektrophorese: Horizontaler Lauf

SDB-SEITE: Vertikaler Lauf

Gießmethode

Gelelektrophorese: Wird beim Abkühlen fest

SDB-SEITE: Sets durch eine chemische Reaktion

Porengröße

Gelelektrophorese: Porengröße ist nicht einheitlich; höher die Agarosekonzentration, kleiner die Porengröße

SDB-SEITE: Porengröße ist einheitlich; das Verhältnis von Acrylamid zu Bisacrylamid bestimmt die Porengröße

Konzentration

Gelelektrophorese: 0.5-2%

SDB-SEITE: 6-15%

Trennung

Gelelektrophorese: 50-20.000 bp Nukleinsäuren

SDB-SEITE: 5-250, 000 Da-Proteine

Bedingungen

Gelelektrophorese: Im Allgemeinen unter nativen Bedingungen ausgeführt

SDB-SEITE: Denaturierungsbedingungen

Vorbereitung

Gelelektrophorese: Einfach

SDB-SEITE: Ein komplexer Prozess

Färbung

Gelelektrophorese: Mit Ethidiumbromid

SDB-SEITE: Coomassie-Färbung oder Silber-Färbung

Abschluss

Die Gelelektrophorese ist eine analytische Technik, die Makromoleküle wie DNA, RNA und Proteine ​​basierend auf ihrer Größe trennt. SDS PAGE ist eine Art der Gelelektrophorese, die hauptsächlich zur Trennung von Proteinen unter denaturierenden Bedingungen verwendet wird. SDS PAGE hat im Vergleich zur regulären Gelelektrophorese ein höheres Auflösungsvermögen. Der Hauptunterschied zwischen Gelelektrophorese und SDS-PAGE besteht in der Art der getrennten Makromoleküle und deren Verfahren.

Referenz:

1. „Gelelektrophorese“. Khan Academy, hier verfügbar2. „SDS Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE).“ Institut Diamantina, 26. April 2017, hier verfügbar

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. „Gelelektrophorese 2“ Von Mnolf – Foto aufgenommen in Innsbruck, Österreich (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia 2. „Coomassie3“ von Yikrazuul – Eigene Arbeit (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia