Die Illumina-Sequenzierung ist eine Sequenzierungsmethode der nächsten Generation, die auch als „Sequenzierung-durch-Synthese" Methode. Die Illumina-Sequenzierung ist an der parallelen Verarbeitung von Millionen von Fragmenten beteiligt. Die vier grundlegenden Schritte des Illumina-Sequenzierungsworkflows sind Bibliotheksvorbereitung, Cluster-Generierung, Sequenzierung und Datenanalyse, die in diesem Artikel näher beschrieben werden.

Abgedeckte Schlüsselbereiche

1. Was ist Illumina-Sequenzierung? – Definition, Fakten, Vorteile 2. Wie funktioniert die Illumina-Sequenzierung? – Prozess der Illumina-Sequenzierung: – Bibliotheksvorbereitung – Cluster-Generierung – Sequenzierung – Datenanalyse

Schlüsselbegriffe: Cluster-Generierung, Datenanalyse, Illumina-Sequenzierung, Bibliotheksvorbereitung, Sequenzierung durch Synthese

Was ist Illumina-Sequenzierung?

Die Illumina Sequencing- oder Sequencing-by-Synthesis (SBS)-Technologie ist die weltweit am weitesten verbreitete Sequenzierungstechnologie der nächsten Generation. Mehr als 90% der Sequenzierungsdaten der Welt werden durch die Illumina-Sequenzierung generiert. Es wurde ursprünglich von Shankar Balasubramanian und David Klenerman an der University of Cambridge entwickelt. Sie gründeten 1998 ein Unternehmen namens Solexa. Dann kaufte Illumina 2007 Solexa und verbesserte die ursprüngliche Technologie schnell. Daher heißt die Methode auch Solexa/Illumina-Sequenzierungsmethode. Der Hauptvorteil der Illumina-Sequenzierung besteht darin, dass sie eine hohe Ausbeute an fehlerfreien Reads liefert.

Wie funktioniert die Illumina-Sequenzierung?

Die vier Schritte, die bei der Illumina-Sequenzierung beteiligt sind, werden unten beschrieben.

Schritt 1. Bibliotheksvorbereitung

Abbildung 1: Markierung und Hinzufügen von Motiven

Schritt 2. Cluster-Generierung

Abbildung 2: Durchflusszelle

Abbildung 3: Klonale Amplifikation

Schritt 3. Sequenzierung

Erstes Lesen der umgekehrten Sequenz

Abbildung 4: Sequencing-by-Synthesis

Index 1 lesen

Index 2 lesen

Zweites Lesen der Vorwärtssequenz

Schritt 4. Datenanalyse

Das folgende Video erklärt den vollständigen Ablauf der Illumina-Sequenzierung.

Abschluss

Die Illumina-Sequenzierung ist eine Sequenzierungsmethode der nächsten Generation. Die Illumina-Sequenzierung ist an der Herstellung einer Sequenzierungsbibliothek mit 200-600 Basenpaaren langen DNA-Fragmenten beteiligt. Die vier Schritte der Illumina-Sequenzierung sind Bibliotheksvorbereitung, Clustererzeugung, Sequenzierung und Datenanalyse. Da die Illumina-Sequenzierung Sequenz-Reads mit hoher Genauigkeit liefert, ist sie die weltweit am weitesten verbreitete Sequenzierungsmethode.

Referenz:

1. „Sequenzierung durch Synthese (SBS)-Technologie.“ Sequenzierungstechnologie | Sequenzierung durch Synthese, hier erhältlich.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. „DNA-Verarbeitungsvorbereitung“ von DMLapato – Eigene Arbeit (CC BY-SA 4.0) über Commons Wikimedia 2. „Oligonukleotidketten in Fließzellen“ Von DMLapato – Eigene Arbeit (CC BY-SA 4.0) über Commons Wikimedia 3. „ Sequenzierung durch Synthese Reversible Terminators“ Von Abizar Lakdawalla (Vortrag) – Ich habe diese Arbeit vollständig selbst erstellt (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia 4. „Cluster Generation“ Von DMLapato – Eigene Arbeit (CC BY-SA 4.0) über Commons Wikimedia