Trypsin ist eine Serinprotease, die Lysin- und Argininreste am C-Terminus von Peptiden spaltet. Es ist das am häufigsten verwendete Enzym in der Zellkultur, um die adhärenten Zellen von den Oberflächen von Kulturgefäßen zu lösen. Trypsin wird von den meisten in Kulturen gezüchteten Zelltypen leicht vertragen. Seine Aktivität kann durch Zugabe von Serum in das Kulturmedium leicht neutralisiert werden. Diese beiden Eigenschaften von Trypsin erleichtern ihre Verwendung in Zellkulturen. Im Allgemeinen wird Trypsin den Zellkulturen mit EDTA zugesetzt. Die Rolle von Trypsin in Zellkulturen wird in diesem Artikel beschrieben.

Abgedeckte Schlüsselbereiche

1. Was ist Trypsin? – Definition, Merkmale, Funktion 2. Wie wirkt Trypsin in der Zellkultur? – Rolle von Trypsin in der Zellkultur

Schlüsselbegriffe: Adhäsive Proteine, Zelladhäsion, Verdauungsenzym, Trypsin, Trypsinisierung

Was ist Trypsin?

Trypsin ist ein Verdauungsenzym, das Proteine ​​im Verdauungssystem vieler Wirbeltiere abbaut. Es kommt im Pankreassaft vor. Trypsin spaltet Lysin- und Argininreste des Carboxy-Terminus von Peptiden. Es spaltet sie jedoch nicht, wenn auf diese beiden Aminosäuren Praline folgt. Die Aktivität von Trypsin wird in vielen biotechnologischen Prozessen genutzt, und die Wirkung von Trypsin ist bekannt als Trypsinierung oder Trypsin-Proteolyse. Die Kristallstruktur von Trypsin ist in Abbildung 1 dargestellt.

Abbildung 1: Trypsin

Der optimale pH-Wert für die Wirkung von Trypsin beträgt 7,6-8,5. Im Allgemeinen wird Phenolrot in Trypsin-Assays verwendet, um den obigen pH-Bereich zu überwachen. Phenolrot gibt in diesem pH-Bereich eine rosa Farbe. Trypsin-Assays werden auf Trockeneis durchgeführt.

Wie funktioniert Trypsin in der Zellkultur?

Die Proteine ​​auf der Plasmamembran sind für eine Vielzahl von Funktionen verantwortlich, die für die Aufrechterhaltung der normalen physiologischen Aktivität der Zelle unerlässlich sind. Einige Plasmamembranproteine ​​wie Cadherinfamilien sind adhäsive Proteine, die als Anker dienen und die Zytoskelettproteine ​​mit der extrazellulären Matrix verbinden. Dies unterstützt die Zelladhäsion und Zellmigration. Die adhäsiven Proteine ​​innerhalb der Plasmamembran sind in Abbildung 2 dargestellt.

Abbildung 2: Zelladhäsive Proteine

In Zellkulturen kann dem Medium Trypsin zugesetzt werden, um die adhärenten Zellen durch Verdau der adhäsiven Proteine ​​von der Oberfläche des Kulturgefäßes zu lösen. Trypsin löst auch Zellen aus Aggregaten durch den Verdau von adhäsiven Proteinen. EDTA wird auch Zellkulturen zusammen mit Trypsin zugesetzt, um zweiwertige Ionen im Medium zu chelatisieren. Calcium- und Magnesiumionen können die Wirkung von Trypsin hemmen. Letztlich hilft Trypsin dabei, einzelne Zellen aus den Zellkulturen zu gewinnen, was die Weiterverarbeitung der Zellen erleichtert.

Abschluss

Trypsin ist ein photolytisches Enzym, das Peptide verdaut. Trypsin wird häufig in Zellkulturen verwendet, um einzelne Zellen zu erhalten, da Trypsin die adhäsiven Proteine ​​verdaut und die Zellen in das Medium freisetzt.

Referenz:

1. "Trypsin-induzierte Proteom-Veränderung während der Zellsubkultur in Säugetierzellen." Journal of Biomedical Science, BioMed Central, 11. Mai 2010, hier verfügbar.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. „1UTN“ Von Benutzer: DrKjaergaard – Eigene Arbeit: Aus PDB-Datei 1UTN. Erstellt mit PyMol (Public Domain) über Commons Wikimedia 2. „Cell Adhesion“ Von ZabMilenko in der englischen Wikipedia – Von en.wikipedia nach Commons übertragen durch Premeditated Chaos mit CommonsHelper (Public Domain) über Commons Wikimedia