Die Hauptunterschied zwischen Southern Northern und Western Blotting ist, dass die Southern-Blotting beinhaltet die Identifizierung von DNA, und Northern-Blotting beinhaltet die Identifizierung von RNA, während Western-Blotting die Identifizierung von Proteinen beinhaltet.

Southern, Northern und Western sind drei Blotting-Techniken, die verwendet werden, um ein spezifisches DNA-, RNA- oder Proteinmolekül in einer Probe nachzuweisen. Während des Blottings werden die Makromoleküle vom Gel auf eine Membran übertragen und zur Bindung mit einer spezifischen Nukleinsäure oder einem Antikörper gebracht, die den Nachweis unterstützen.

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Was ist Southern Blotting?

Southern-Blotting ist die Technik, die verwendet wird, um eine spezifische DNA-Sequenz in einem DNA-Gemisch nachzuweisen. Die grundlegenden Schritte eines Southern-Blots sind wie folgt.

Elektrophorese – Es trennt die DNA-Probe in verschiedene Banden basierend auf der Größe durch Gelelektrophorese.

Überweisen – Während des Transfers wird eine Nitrozellulosemembran mit dem Gel in Kontakt gebracht und DNA-Banden wandern durch die Kapillarwirkung auf die Membran.

Erkennung spezifischer Sequenzen – Die Zielsequenz auf der Membran wird mit der spezifischen, markierten Oligonukleotidsequenz hybridisiert, die Hybridisierungssonde genannt wird. Die Hybridisierungssonde ist ein kurzes, 100-500 bp großes einzelsträngiges DNA-Molekül. Stringenz, die von der Temperatur und der Salzkonzentration des Hybridisierungspuffers abhängt, beeinflusst die Hybridisierung. Eine hohe Stringenz, definiert durch die hohe Temperatur und eine niedrige Salzkonzentration, erhöht die Spezifität der Hybridisierung, während eine niedrige Stringenz, die durch eine niedrige Temperatur und eine hohe Salzkonzentration definiert wird, die Spezifität verringert.

Abbildung 1: Southern Blotting

Der Hauptzweck des Southern-Blottings besteht darin, eine spezifische DNA-Sequenz in einer Probe nachzuweisen. Die Technik wird bei DNA-Fingerabdrücken, Vaterschaftstests, Opferidentifizierung und kriminellen Identifizierung verwendet. Es hilft auch bei der Identifizierung spezifischer Gene, bei RFLP (Restriktionsfragmentlängen-Polymorphismus), Mutation und Identifizierung von Genumlagerungen, genetischen Krankheiten und Infektionserregern.

Was ist Northern Blotting?

Northern Blotting ist die Technik, die verwendet wird, um eine spezifische RNA in einem RNA-Gemisch nachzuweisen. Die grundlegenden Schritte eines Northern Blots sind wie folgt.

Elektrophorese – Es trennt die RNA-Probe nach der Größe in verschiedene Banden.

Überweisen – Durch Kapillarwirkung werden RNA-Banden im Gel auf die Membran übertragen.

Erkennung spezifischer Sequenzen – Die Ziel-RNA-Sequenz wird durch Hybridisierung mit einer markierten Oligonukleotidsonde aus DNA nachgewiesen.

Abbildung 2: Northern Blotting

Da Northern Blotting spezifische RNA-Sequenzen in einer Probe identifizieren kann, kann es in Genexpressionsstudien verwendet werden. Es kann auch bei der Diagnose von Krankheiten helfen.

Was ist Western Blotting?

Western Blot ist eine Blotting-Technik, die verwendet wird, um eine bestimmte Aminosäuresequenz in einer Mischung von Proteinen nachzuweisen. Die grundlegenden Schritte eines Western Blots sind wie folgt.

Elektrophorese – Einzelne Proteine ​​werden anhand der Größe per SDS-PAGE in Banden getrennt.

Überweisen – Proteinbanden im Gel werden durch Blotting auf eine Membran übertragen.

Nachweis spezifischer Proteine – Die Membran mit separierten Proteinen wird mit einem primären Antikörper inkubiert, der nur an das spezifische Protein bindet. Zum Nachweis des Primärantikörpers wird ein Sekundärantikörper verwendet, der mit einem Enzym wie Meerrettichperoxidase (HRP) oder alkalischer Phosphatase markiert ist. Bei Inkubation mit dem Substrat visualisiert die Enzymwirkung die Bindung von Antikörpern an eine spezifische Region auf der Membran.

Abbildung 3: Western Blotting

Western-Blotting wird auch Protein-Blot oder Immunblotting genannt. Es kann die Anzahl der Proteine ​​in einer Probe, das Vorhandensein von Bakterien und Viren im Serum sowie das Vorhandensein von HIV-Antikörpern im Serum identifizieren. Es kann auch defekte Proteine ​​erkennen. Darüber hinaus ist Western Blotting der definitive Test für Hepatitis B, Creutzfeldt-Jacob-Krankheit, Borreliose und Herpes.

Ähnlichkeiten zwischen Southern Northern und Western Blotting

Unterschied zwischen Southern Northern und Western Blotting

Definition

Southern-Blotting bezieht sich auf ein Verfahren zur Identifizierung spezifischer DNA-Sequenzen, während sich Northern-Blotting auf eine Anpassung des Southern-Blot-Verfahrens bezieht, das verwendet wird, um spezifische Sequenzen von RNA durch Hybridisierung mit komplementärer DNA nachzuweisen, und Western-Blotting bezieht sich auf ein Blotting-Verfahren, das verwendet wird, um spezifische Aminosäuren zu identifizieren -Säuresequenzen in Proteinen.

Entwickelt von

Southern Blotting wurde 1975 von Edward M. Southern entwickelt. Northern Blotting wurde 1979 von Alwine und seinen Kollegen entwickelt und Western Blotting wurde 1979 von George Starks Gruppe an der Stanford University entwickelt.

Molekül erkannt

Southern-Blotting erkennt spezifische DNA-Sequenzen, Northern-Blotting erkennt spezifische RNA-Sequenzen, während Western-Blotting spezifische Proteine ​​erkennt.

Gelelektrophorese

Southern-Blotting beinhaltet Agarosegelelektrophorese, und Northern-Blotting beinhaltet das Denaturieren von Formaldehyd-Agarose-Gel, während Western-Blotting SDS-PAGE beinhaltet.

Blotting-Methode

Sowohl Southern- als auch Northern-Blotting beinhalten einen Kapillartransfer, während Western-Blotting einen elektrischen Transfer beinhaltet.

Sonden

Southern-Blotting verwendet DNA-Sonden, während Northern-Blotting cDNA-Sonden verwendet und Western-Blotting primäre und sekundäre Antikörper verwendet.

Anwendung

Southern Blotting wird zur Identifizierung spezifischer Gensequenzen und beim DNA-Fingerprinting verwendet. Northern-Blotting wird in der Genexpressionsanalyse verwendet, und Western-Blotting wird in der Krankheitsdiagnose verwendet.

Abschluss

Southern-Blotting identifiziert eine spezifische DNA-Sequenz, während Northern-Blotting eine spezifische RNA-Sequenz identifiziert und Western-Blotting eine spezifische Proteinsequenz in einer Probe identifiziert. Daher besteht der Hauptunterschied zwischen den drei Blotting-Techniken in der Art des Makromoleküls, das sie erkennen.

Referenz:

1. "Southern Blotting: Prinzip, Verfahren und Anwendung -." ONLINE BIOLOGY NOTES, 4. Dez. 2017, hier verfügbar2. Kochunni, Deena T und Jazir Haneef. „Northern Blotting: Prinzip, Verfahren und Anwendungen.“ Biologieprüfungen 4 U, hier verfügbar3. "Western Blotting-Technik: Prinzip, Verfahren und Anwendung -." BIOLOGY ONLINE NOTES, 4. Dez. 2017, hier erhältlich

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. „Abbildung 17 01 05“ Von CNX OpenStax – (CC BY 4.0) über Commons Wikimedia2. „Northern Blot Diagramm“ Von Ilewieszoośmiornicach – Eigene Arbeit (CC BY-SA 4.0) über Commons Wikimedia 3. „Western Blotting“ Von Cawang – Eigene Arbeit (CC0) über Commons Wikimedia